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莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作步驟
點擊次數(shù):621 更新時間:2022-04-12

莢膜阿耶羅菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗操作:

1. 模板制備(樣本制備區(qū))

建議使用配套水生動物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品,具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2.添加模板(模板添加區(qū),放置于冰盒中進行)

請于-20℃條件下保存,有效期 12 個月

取出所需測試數(shù)的已含有反應(yīng)液 A-TSV-I 的 PCR 管,將試劑*解凍,離心 30 秒,在管蓋上標記管名(陰性對照管 NG、樣品 XX、陽性對照管 PG)。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I,蓋上陰性對照管管蓋,其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板,順序為待測樣品模板、PG-TSV-I,依次蓋好各管管蓋,離心 30 秒,立即進行擴增反應(yīng)。

3. 擴增反應(yīng)(擴增及產(chǎn)物分析區(qū))

①恒溫儀器 63℃條件下反應(yīng) 60 min。待儀器升溫至 63℃后,新建程序,設(shè)置實驗名稱及反應(yīng)時間,將步驟 2中離心后的 PCR 反應(yīng)管放入恒溫?zé)晒夥肿訖z測儀,點擊開始檢測。

②若使用熒光定量 PCR 儀,則熒光基團選擇 FAM,淬滅基團選擇 None,將 63℃ 15 s,63℃ 45 s 作為一個循環(huán),于 63℃ 45 s 處收集熒光信號,60 個循環(huán)。




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