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VE Elisa Kit可溶性抗原或抗體吸附于固相載體而成為不溶形式,這是進(jìn)行酶標(biāo)記測(cè)定的基本條件。
許多物質(zhì)可作為固相載體,如纖維素、交聯(lián)右旋糖苷、瓊脂糖珠、聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯及聚氯乙烯等等。但在ELISA中zui常用的是聚苯乙烯或聚氯乙烯微量反應(yīng)板及塑料管。
由于微量反應(yīng)板所用試劑量少,操作方便,適合于大規(guī)模應(yīng)用。國(guó)產(chǎn)聚苯乙烯微量反應(yīng)板目前已大量應(yīng)用于ELISA測(cè)定,并且獲得了滿意的結(jié)果。但每批微量反應(yīng)板對(duì)抗原或抗體蛋白質(zhì)的吸附性能是有顯著差別的。實(shí)驗(yàn)證明,吸附效果似乎與塑料的類型及其表面性質(zhì)有關(guān)。特別是塑料制品在加工過(guò)程中因工藝不同或受其他因素的影響而造成吸附性能的差異,甚至*喪失吸附能力。
因此,VE Elisa Kit對(duì)每批制品在使用前,必須經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室鑒定,鑒定的方法和標(biāo)準(zhǔn)是對(duì)每批購(gòu)置的微量反應(yīng)板或塑料管抽樣,用0.2ug/ml純化的正常人IgG進(jìn)行包被,經(jīng)洗滌后加酶標(biāo)記抗人球蛋白進(jìn)行反應(yīng),再經(jīng)孵育洗滌,加底物顯色終止反應(yīng)后,逐孔在酶標(biāo)比色計(jì)中測(cè)定其消光值、光密度(O.D值)。一般認(rèn)為全板中每?jī)煽组gO.D值的誤差不超過(guò)10%為合格。如果中間孔與四周孔O.D值相差太大,或者反應(yīng)板的這一邊與另一邊凹孔的O.D值相差大,均不合格。
此外,還要檢查陽(yáng)性和陰性參考血清O.D值是否有明顯差別。一般要求有10倍左右的差異為合格,微量反應(yīng)板或塑料管在使用前并不一定通過(guò)特殊處理。VE Elisa Kit用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。