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細(xì)胞簡介：

膀胱癌是一種泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率和死亡率較高，膀胱癌分為非肌浸潤性膀胱癌與肌肉浸潤性膀胱癌。

腫瘤微環(huán)境理論認(rèn)為，腫瘤微環(huán)境與細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤對化療反應(yīng)的重要決定因素。腫瘤微環(huán)境包括和非細(xì)胞，以及細(xì)胞外成分，在腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移中起著重要的作用。其中，非細(xì)胞主要由腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞構(gòu)成。

成纖維細(xì)胞是實(shí)體瘤中主要的細(xì)胞，它們結(jié)合結(jié)締組織的細(xì)胞外基質(zhì)，是組織結(jié)構(gòu)完整性的基礎(chǔ)。已有研究表明，腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞是腫瘤演進(jìn)的重要促進(jìn)劑，它們可通過分泌一種或多種可溶性因子如細(xì)胞因子、生長因子、趨化因子和基質(zhì)降解酶等，腫瘤細(xì)胞響應(yīng)這些可溶性因子作用，進(jìn)而改變腫瘤細(xì)胞的生長方式機(jī)器發(fā)展演進(jìn)過程。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于手術(shù)切除的膀胱癌組織。

2)細(xì)胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：成纖維樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD glucosidase)檢測試劑盒 ，英文名： 1,3-βD glucosidase ELISA Kit

Mouse calcitonin (CT) ELISA Kit 小鼠降鈣素(CT)檢測試劑盒

MouseHelicobacterpyloriIgG,Hp-IgGELISAKit 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanplasmin-aiplasmincomplex,PAPELISAKit人纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物

通用型總脂蛋白(TotalL-Cholesterol)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次

ELISAKitIgE大鼠免疫球蛋白E

DPP4重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白 Protein

趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)重組蛋白 Recombinant Chemokine C-X-C-Motif Ligand 16 (CXCL16)

CGA重組人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 蛋白  Protein

GFRA3 Protein Human 重組人 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein Influenza B 重組乙型流感 (B/Brisbane/60/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

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小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA 試劑盒

Human deoxypyridinoline / deoxypyridinoline (DPD) ELISA Kit 人脫氧酚/脫氧啉(DPD)檢測試劑盒

HumaniggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit 人髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1(EM-1)檢測試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanCarbohydrateaigen19-9,CA19-9檢測試劑盒人糖鏈抗原19-9(CA19-9)檢測試劑盒

重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染試劑盒10次

HumansolubleFactor-relatedApoptosisligand,sFASL/Apo-1ELISAKit人可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)檢測試劑盒

人膀胱癌相關(guān)成纖維細(xì)胞兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體檢測試劑盒   兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體試劑盒、兔子可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子睪檢測試劑盒   兔子睪試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子睪試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子睪試劑盒、兔子睪檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子端粒酶檢測試劑盒   兔子端粒酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子端粒酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子端粒酶試劑盒、兔子端粒酶檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔子催乳素檢測試劑盒   兔子催乳素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子催乳素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子催乳素試劑盒、兔子催乳素檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。