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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠心臟纖維原分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數(shù)的70%，其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成。纖維細胞是機能不活躍的成纖維細胞。胞體呈梭形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。電鏡下可見，細胞中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體均不發(fā)達。當(dāng)組織受損時，纖維細胞可轉(zhuǎn)化為成纖維細胞而參與修復(fù)過程。纖維細胞和成纖維細胞是處于不同功能狀態(tài)的同一種細胞，如在組織損傷后的修復(fù)過程中，纖維細胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細胞。纖維細胞較小，呈多角形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核亦較小，染色較深，電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達。成纖維細胞較大，呈星形或梭形，有突起，細胞核呈卵圓形，染色質(zhì)稀疏，染色淡，核仁明顯，胞質(zhì)較多。成纖維細胞能合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和蛋白多糖，形成膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維以及基質(zhì)成分。心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負責(zé)細胞基質(zhì)外的合成，當(dāng)心肌損傷時能產(chǎn)生旁分泌生長因子。心肌成纖維細胞是心臟結(jié)締組織中常見的細胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細胞，其功能活動也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。因此，對心肌成纖維細胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個重點。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠心臟纖維原采用膠原酶消化法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠心臟纖維原經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠細胞色素P450氧化還原酶(CPR)檢測試劑盒 ，英文名： CPR ELISA Kit

Mouse neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 小鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)檢測試劑盒

Mouseapoprotein,apo-A1ELISAKit 小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHSP-90(HumanHeatShockProtein90)ELISAKit人熱休克蛋白90

細胞JNK2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitIL-2sRα大鼠白介素2可溶性受體α鏈

PROCR重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 標簽) Protein

Insulin (from porcine pancreas 1mgInsulin (from porcine pancreas) 胰島素

HMGB1重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白 Protein

DPEP2 Protein Human 重組人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (Fc 標簽)

BCL2L1 Protein Mouse 重組小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 標簽)

Insulin (from porcine pancreas 1mgInsulin (from porcine pancreas) 胰島素

DPEP2 Protein Human 重組人 DPEP2 / MBD-2 蛋白 (Fc 標簽)

PROCR重組食蟹猴 Epcr / PROCR 蛋白 (Fc 標簽) Protein

BCL2L1 Protein Mouse 重組小鼠 BCL2L1 / Bcl-XL 蛋白 (aa 1-212, His 標簽)

HMGB1重組人 HMGB1 / HMG1 蛋白 Protein

小鼠抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒

HumanCardiacmyosin-lightchains1,CMLC-1ELISAKit 人心肌肌凝蛋白輕鏈1(CMLC-1)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAmylin檢測試劑盒人胰淀素(Amylin)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物蛋白巰基/結(jié)合巰基含量熒光定量檢測試劑盒20次

MonkeyInsulin,INSELISAKit猴胰島素(INS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠心臟纖維原細胞小鼠骨形成蛋白檢測試劑盒   小鼠骨形成蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠骨形成蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠骨形成蛋白試劑盒、小鼠骨形成蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠膠原酶I檢測試劑盒   小鼠膠原酶I試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠膠原酶I試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膠原酶I試劑盒、小鼠膠原酶Ieisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠膠原酶II檢測試劑盒   小鼠膠原酶II試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠膠原酶II試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膠原酶II試劑盒、小鼠膠原酶IIeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠降鈣素檢測試劑盒   小鼠降鈣素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠降鈣素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠降鈣素試劑盒、小鼠降鈣素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。